RESUMO E EXPLICAÇÃO DO TESTE
A malária é uma doença hemolítica febril transmitida por mosquitos que infecta mais de 200 milhões de pessoas e mata mais de 1 milhão de pessoas por ano.É causada por quatro espécies de Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale e P. malariae.Todos esses plasmódios infectam e destroem os eritrócitos humanos, produzindo calafrios, febre, anemia e esplenomegalia.P. falciparum causa mais doenças graves do que as outras espécies de plasmódio e é responsável pela maioria das mortes por malária.P. falciparum e P. vivax são os patógenos mais comuns, entretanto, há considerável variação geográfica na distribuição das espécies.
Tradicionalmente, a malária é diagnosticada pela demonstração dos organismos em esfregaços espessos de sangue periférico corados com Giemsa, e as diferentes espécies de plasmódio são distinguidas por sua aparência em eritrócitos infectados1.A técnica é capaz de diagnósticos precisos e confiáveis, mas apenas quando realizada por microscopistas qualificados usando protocolos definidos2, o que apresenta grandes obstáculos para as áreas remotas e pobres do mundo.
O Malaria Pf / Pan Antigen Rapid Test Kit foi desenvolvido para solucionar esses obstáculos.O teste utiliza um par de anticorpos monoclonais e policlonais para a proteína específica de P. falciparum, Histidine Repeat Protein II (pHRP-II), e um par de anticorpos monoclonais para plasmódio Lactato Desidrogenase (pLDH), uma proteína produzida pelas quatro espécies de plasmódio, permitindo assim a detecção e diferenciação simultâneas da infecção por P. falciparum e ou qualquer um dos outros três plasmódios.Pode ser realizada por pessoal não treinado ou minimamente qualificado, sem equipamento de laboratório.
PRINCÍPIO
O kit Pf/Pan Malaria Rapid Test é um imunoensaio cromatográfico de fluxo lateral.Os componentes da tira de teste consistem em: 1) uma almofada de conjugado cor de vinho contendo anticorpo de camundongo anti-pLDRP-II conjugado com ouro coloidal (pHRP II-gold conjugados) e anticorpo de camundongo anti-pLDH conjugado com ouro colóide (pLDH-gold conjugados),
2) uma tira de membrana de nitrocelulose contendo duas bandas teste (bandas Pan e Pv) e uma banda controle (banda C).A banda Pan é pré-revestida com anticorpo monoclonal anti-pLDH pelo qual a infecção com qualquer uma das quatro espécies de plasmódio pode ser detectada, a banda Pf é pré-revestida com anticorpos policlonais anti-pHRP-II para a detecção de infecção por Pf, e a banda C é revestida com IgG anti-rato de cabra.
Durante o ensaio, um volume adequado da amostra de sangue é dispensado no poço da amostra (S) do cassete de teste, um tampão de lise é adicionado ao poço do tampão (B).O tampão contém um detergente que lisa os glóbulos vermelhos e libera vários antígenos plasmódicos, que migram por ação capilar através da tira mantida no cassete.Se o pHRP-II estiver presente na amostra, irá ligar-se aos conjugados pHRP II-ouro.O imunocomplexo é então capturado na membrana pelos anticorpos anti-pHRPII pré-revestidos, formando uma banda Pf cor de vinho, indicando um resultado de teste Pf positivo.A pLDH, se presente na amostra, ligar-se-á aos conjugados pLDH de ouro.O imunocomplexo é então capturado na membrana pelo anticorpo antipLDH pré-revestido, formando uma banda Pan cor de vinho, indicando um resultado de teste positivo para plasmódio.Na ausência da banda Pan, um resultado de teste positivo para qualquer um dos outros três plasmódios pode ser recomendado.
A ausência de quaisquer bandas de teste (Pan e Pf) sugere um resultado negativo.O teste contém um controle interno (banda C) que deve exibir uma faixa cor de vinho do imunocomplexo de cabra anti-rato IgG / camundongo IgG (pHRP-II e conjugados pLDH-ouro), independentemente do desenvolvimento da cor em qualquer uma das bandas de teste.Caso contrário, o resultado do teste é inválido e a amostra deve ser testada novamente com outro dispositivo.
